食品中總砷的測定方法

　　1 主題內(nèi)容與適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了各類食品中總砷的測定方法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中總砷的測定。

　　其最低檢出濃度：銀鹽法(測定用樣品相當(dāng)5g)為0.2mg/kg;砷斑法(測定用樣品相當(dāng)2g)為0.25mg/kg;硼氫化物還原比色法(測定用樣品相當(dāng)5g)為0.05mg/kg。

　　第一篇 銀鹽法(第一法)

　　2 原理

　　樣品經(jīng)消化后，以碘化鉀、氯化亞錫將高價砷還原為三價砷，然后與鋅粒和酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成砷化氫，經(jīng)銀鹽溶液吸收后，形成紅色膠態(tài)物，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

　　3 試劑

　　除特別注明外，所用試劑為分析純，水為去離子水。

　　3.1 硝酸。

　　3.2 硫酸。

　　3.3 鹽酸。

　　3.4 氧化鎂。

　　3.5 無砷鋅粒。

　　3.6 硝酸—高氯酸混合溶液(4+1)：量取80mL硝酸，加20mL高氯酸，混勻。

　　3.7 硝酸鎂溶液(150g/L)：稱取15g硝酸鎂[Mg(NO3)2·6H2O]，溶于水中，并稀釋至100mL。

　　3.8 碘化鉀溶液(150g/L)：貯存于棕色瓶中。

　　3.9 酸性氯化亞錫溶液：稱取40g氯化亞錫(SnCl2·2H2O)，加鹽酸溶解并稀釋至100mL，加入數(shù)顆金屬錫粒。

　　3.10 鹽酸(1+1)：量取50mL鹽酸，加水稀釋至100mL。

　　3.11 乙酸鉛溶液(100g/L)。

　　3.12 乙酸鉛棉花：用乙酸鉛溶液(100g/L)浸透脫脂棉后，壓除多余溶液，并使疏松，在100℃以下干燥后，貯存于玻璃瓶中。

　　3.13 氫氧化鈉溶液(200g/L)。

　　3.14 硫酸(6+94)：量取6.0mL硫酸，加于80mL水中，冷后再加水稀釋至100mL。

　　3.15 二乙基二硫代氨基甲酸銀—三乙醇胺—三氯甲烷溶液：稱取0.25g二乙基二硫代氨基甲酸銀[(C2H5)2NCS2Ag]，置于乳缽中，加少量三氯甲烷研磨，移入100mL量筒中，加入1.8mL三乙醇胺，再用三氯甲烷分次洗滌乳缽，洗液一并移入量筒中，再用三氯甲烷稀釋至100mL，放置過夜。濾入棕色瓶中貯存。

　　3.16 砷標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.1320g在硫酸干燥器中干燥過的或在100℃干燥2h的三氧化二砷，加5mL氫氧化鈉溶液(200g/L)，溶解后加25mL硫酸(6+94)，移入1000mL容量瓶中，加新煮沸冷卻的水稀釋至刻度，貯存于棕色玻塞瓶中。此溶液每毫升相當(dāng)于0.10mg砷。

　　3.17 砷標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于100mL容量瓶中，加1mL硫酸(6+94)，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于1.0?g砷。

　　4 儀器

　　4.1 可見分光光度計。

　　4.2 測砷裝置：見圖1。

　　4.2.1 100～150mL錐形瓶：19號標(biāo)準(zhǔn)口。

　　4.2.2 導(dǎo)氣管：管口19號標(biāo)準(zhǔn)口或經(jīng)堿處理后洗凈的橡皮塞與錐形瓶密合時不應(yīng)漏氣。管的另一端管徑為1.0mm。

　　3.2.3 吸收管：10mL刻度離心管作吸收管用。

　　5 樣品消化

　　5.1 硝酸高氯酸—硫酸法

　　5.1.1 糧食、粉絲、粉條、豆干制品、糕點(diǎn)、茶葉等及其他含水分少的固體食品：稱取5.00g或10.00g的粉碎樣品，置于250～500mL定氮瓶中，先加水少許使?jié)駶�，加�?shù)粒玻璃珠、10～15mL硝酸-高氯酸混合液，放置片刻，小火緩緩加熱，待作用緩和，放冷。沿瓶壁加入5mL或10mL硫酸，再加熱，至瓶中液體開始變成棕色時，不斷沿瓶壁滴加硝酸-高氯酸混合液至有機(jī)質(zhì)分解完全。加大火力，至產(chǎn)生白煙，待瓶口白煙冒凈后，瓶內(nèi)液體再產(chǎn)生白煙為消化完全，該溶液應(yīng)澄明無色或微帶黃色，放冷。在操作過程中應(yīng)注意防止爆沸或爆炸。

　　加20mL水煮沸，除去殘余的硝酸至產(chǎn)生白煙為止，如此處理兩次，放冷。將冷后的溶液移入50mL或100mL容量瓶中，用水洗滌定氮瓶，洗液并入容量瓶中，放冷，加水至刻度，混勻。定容后的溶液每10mL相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)加入硫酸量1mL。

　　取與消化樣品相同量的硝酸-高氯酸混合液和硫酸，按同一方法做試劑空白試驗。

　　5.1.2 蔬菜、水果：稱取25.00g或50.00g洗凈打成勻漿的樣品，置于250～500mL定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠、10～15mL硝酸-高氯酸混合液，以下按5.1.1自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每10mL相當(dāng)于5g樣品，相當(dāng)加入硫酸1mL。

　　5.1.3 醬、醬油、醋、冷飲、豆腐、腐乳、醬腌菜等：稱取10.00g或20.00g樣品(或吸取10.0mL或20.0mL液體樣品)，置于250～500mL定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠、5～15mL硝酸-高氯酸混合液。以下按5.1.1自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每10mL相當(dāng)于2g或2mL樣品。

　　5.1.4 含乙醇飲料或含二氧化碳飲料：吸取10.00mL或20.00mL樣品，置于250～500mL定氮瓶中。加數(shù)粒玻璃珠，先用小火加熱除去乙醇或二氧化碳，再加5～10mL硝酸-高氯酸混合液，混勻后，以下按5.1.1自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每10mL相當(dāng)于2mL樣品。

　　吸取5～10mL水代替樣品，加與消化樣品相同量的硝酸-高氯酸混合液和硫酸，按相同操作方法做試劑空白試驗。

　　5.1.5 含糖量高的食品：稱取5.00g或10.0g樣品，置于250～500mL定氮瓶中，先加少許水使?jié)駶�，加�?shù)粒玻璃珠、5～10mL硝酸-高氯酸混合后，搖勻。緩緩加入5mL或10mL硫酸，待作用緩和停止起泡沫后，先用小火緩緩加熱(糖分易炭化)，不斷沿瓶壁補(bǔ)加硝酸-高氯酸混合液，待泡沫全部消失后，再加大火力，至有機(jī)質(zhì)分解完全，發(fā)生白煙，溶液應(yīng)澄明無色或微帶黃色，放冷。以下按5.1.1自“加20mL水煮沸”起依法操作。

　　5.1.6 水產(chǎn)品：取可食部分樣品搗成勻漿，稱取5.00g或10.0g(海產(chǎn)藻類、貝類可適當(dāng)減少取樣量)，置于250～500mL定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，5～10mL硝酸-高氯酸混合液，混勻后，以下按5.1.1自“沿瓶壁加入5mL或10mL硫酸”起依法操作。

　　5.2 硝酸-硫酸法

　　以硝酸代替硝酸-高氯酸混合液進(jìn)行操作。

　　5.3 灰化法

　　5.3.1 糧食、茶葉及其他含水分少的食品：稱取5.00g磨碎樣品，置于坩堝中，加1g氧化鎂及10mL硝酸鎂溶液，混勻，浸泡4h。于低溫或置水浴鍋上蒸干，用小火炭化至無煙后移入馬弗爐中加熱至550℃，灼燒3～4h，冷卻后取出。加5mL水濕潤后，用細(xì)玻棒攪拌，再用少量水洗下玻棒上附著的灰分至坩堝內(nèi)。放水浴上蒸干后移入馬弗爐550℃灰化2h，冷卻后取出。

　　加5mL水濕潤灰分，再慢慢加入10mL鹽酸(1+1)，然后將溶液移入50mL容量瓶中，坩堝用鹽酸(1+1)洗滌3次，每次5mL，再用水洗滌3次，每次5mL，洗液均并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻。定容后的溶液每10mL相當(dāng)于1g樣品，其加入鹽酸量不少于(中和需要量除外)1.5mL。全量供銀鹽法測定時，不必再加鹽酸。

　　按同一操作方法做試劑空白試驗。

　　5.3.2 植物油：稱取5.00g樣品，置于50mL瓷坩堝中，加10g硝酸鎂，再在上面覆蓋2g氧化鎂，將坩堝置小火上加熱，至剛冒煙，立即將坩堝取下，以防內(nèi)容物溢出，待煙小后，再加熱至炭化完全。將坩堝移至馬弗爐中，550℃以下灼燒至灰化完全，冷后取出。

　　加5mL水濕潤灰分，再緩緩加入15mL鹽酸(1+1)，然后將溶液移入50mL容量瓶中，坩堝用鹽酸(1+1)洗滌5次，每次5mL，洗液均并入容量瓶中，加鹽酸(1+1)至刻度，混勻。定容后的溶液每10mL相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)于加入鹽酸量(中和需要量除外)1.5mL。

　　按同一操作方法做試劑空白試驗。

　　5.3.3 水產(chǎn)品：取可食部分樣品搗成勻漿，稱取5.00g置于坩堝中，加1g氧化鎂及10mL硝酸鎂溶液，混勻，浸泡4h。以下按5.3.1自“于低溫或置水浴鍋上蒸干”起依法操作。

　　6 分析步驟

　　吸取一定量的消化后的定容溶液(相當(dāng)于5g樣品)及同量的試劑空白液，分別置于150mL錐形瓶中，補(bǔ)加硫酸至總量為5mL，加水至50～55mL。

　　6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

　　吸取0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0?g)，分別置于150mL錐形瓶中，加水至40mL，再加10mL硫酸(1+1)。

　　6.2 用濕法消化液

　　于樣品消化液，試劑空白液及砷標(biāo)準(zhǔn)溶液中各加3mL碘化鉀溶液(150g/L)，0.5mL酸性氯化亞錫溶液，混勻，靜置15min。各加入3g鋅粒，立即分別塞上裝有乙酸鉛棉花的導(dǎo)氣管，并使管尖端插入盛有4mL銀鹽溶液的離心管中的液面下，在常溫下反應(yīng)45min后，取下離心管，加三氯甲烷補(bǔ)足4mL。用1cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長520nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　6.3 用灰化法消化液

　　取灰化法消化液及試劑空白液分別置于150mL錐形瓶中。吸取0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0?g砷)，分別置于150mL錐形瓶中，加水至43.5mL，再加6.5mL鹽酸。以下按6.2自“于樣品消化液”起依法操作。

　　7 計算

　　式中：X——樣品中砷的含量，mg/Kg或mg/L;

　　m1——測定用樣品消化液中砷的質(zhì)量，?g;

　　m2——試劑空白液中砷的質(zhì)量，?g;

　　m——樣品質(zhì)量(體積)，g(mL);

　　V1——樣品消化液的總體積，mL;

　　V2——測定用樣品消化液的體積，mL。

　　結(jié)果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。

　　8 允許差

　　相對相差≤10%。

　　第二篇 砷斑法(第二法)

　　9 原理

　　樣品經(jīng)消化后，以碘化鉀、氯化亞錫將高價砷還原為三價砷，然后與鋅粒和酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成砷化氫，再與溴化汞試紙生成黃色至橙色的色斑，與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較定量。

　　10 試劑

　　10.1 同銀鹽法3.1～3.14，3.16，3.17。

　　10.2 溴化汞-乙醇溶液(50g/L)：稱取25g溴化汞用少量乙醇溶解后，再定容至500mL。

　　10.3 溴化汞試紙：將剪成直徑2cm的圓形濾紙片，在溴化汞乙醇溶液(50g/L)中浸漬1h以上，保存于冰箱中，臨用前取出置暗處陰干備用。

　　11 儀器

　　11.1 測砷裝置：見圖2。

　　11.1.1 100mL錐形瓶。

　　11.1.2 橡皮塞：中間有一孔。

　　11.1.3 玻璃測砷管：全長18cm，上粗下細(xì)，自管口向下至14cm一段的內(nèi)徑為6.5mm，自此以下逐漸狹細(xì)，末端內(nèi)徑約為1～3mm，近末端1cm處有一孔，直徑2mm，狹細(xì)部分緊密插入橡皮塞中，使下部伸出至小孔恰在橡皮塞下面。上部較粗部分裝放乙酸鉛棉花，長5～6cm，上端至管口處至少3cm，測砷管頂端為圓形扁平的管口上面磨平，下面兩側(cè)各有一鉤，為固定玻璃帽用。

　　11.1.4 玻璃帽：下面磨平，上面有彎月形凹槽，中央有圓孔，直徑6.5mm。使用時將玻璃帽蓋在測砷管的管口，使圓孔互相吻合，中間夾一溴化汞試紙光面向下，用橡皮圈或其他適宜的方法將玻璃帽與測砷管固定。

　　12 樣品消化

　　同第5章。

　　13 分析步驟

　　吸取一定量第5章中樣品消化后定容的溶液(相當(dāng)于2g糧食，4g蔬菜、水果，4mL冷飲，5g植物油，其他樣品參照此量)及同量的試劑空白液分別置于測砷瓶中，加5mL碘化鉀溶液(150g/L)、5滴酸性氯化亞錫溶液及5mL鹽酸(樣品如用硝酸-高氯酸-硫酸或硝酸-硫酸消化液，則要減去樣品中硫酸毫升數(shù);如用灰化法消化液，則要減去樣品中鹽酸毫升數(shù))，再加適量水至35mL(植物油不再加水)。

　　吸取0，0.5，1.0，2.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)0，0.5，1.0，2.0?g砷)，分別置于測砷瓶中，各加

　　5mL碘化鉀溶液(150g/L)，5滴酸性氯化亞錫溶液及5mL鹽酸，各加水至35mL(測定植物油時加水至60mL)。

　　于盛樣品消化液，試劑空白液及砷標(biāo)準(zhǔn)溶液的測砷瓶中各加3g鋅粒，立即塞上預(yù)先裝有乙酸鉛棉花及溴化汞試紙的測砷管，于25℃放置1h，取出樣品及試劑空白的溴化汞試劑紙與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較。

　　14 計算

　　同第7章。

　　結(jié)果的表述：算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。

　　15 允許差

　　相對相差≤20%。

　　第三篇 硼氫化物還原比色法(第三法)

　　16 原理

　　樣品經(jīng)消化，其中砷以五價形式存在。當(dāng)溶液氫離子濃度大于1.0mol/L時，加入碘化鉀-硫脲并結(jié)合加熱，能將五價砷還原為三價砷。在酸性條件下，硼氫化鉀將三價砷還原為負(fù)三價，形成砷化氫氣體，導(dǎo)入吸收液中呈黃色，黃色深淺與溶液中砷含量成正比。與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

　　17 試劑

　　17.1 碘化鉀(500g/L)+硫脲溶液(50g/L)(1+1)。

　　17.2 氫氧化鈉溶液(400g/L)和氫氧化鈉溶液(100g/L)。

　　17.3 硫酸(1+1)。

　　17.4 吸收液

　　17.4.1 硝酸銀溶液(8g/L)：稱取4.07g硝酸銀于500mL燒杯中，加入適量水溶解后加入30mL硝酸，加水至500mL，貯于棕色瓶中。

　　17.4.2 聚乙烯醇溶液(4g/L)：稱取0.4g聚乙烯醇(聚合度1500～1800)于小燒杯中，加入100mL水，沸水浴中加熱，攪拌至溶解，保溫10min，取出放冷備用。

　　17.4.3 吸收液：取17.4.1和17.4.2各一份，加入二份體積的乙醇(95%)，混勻作為吸收液。使用時現(xiàn)配。

　　17.5 硼氫化鉀片：將硼氫化鉀與氯化鈉按1∶4質(zhì)量比混合磨細(xì)，充分混勻后在壓片機(jī)上制成直徑10mm，厚4mm的片劑，每片為0.5g。避免在潮濕天氣時壓片。

　　17.6 乙酸鉛(100g/L)棉花：將脫脂棉泡于乙酸鉛溶液(100g/L)中，數(shù)分鐘后擠去多余溶液，攤開棉花，80℃烘干后貯于廣口玻璃瓶中。

　　17.7 檸檬酸(1.0mol/L)-檸檬酸銨(1.0mol/L)：稱取192g檸檬酸、243g檸檬酸銨，加水溶解后稀釋至1000mL。

　　17.8 砷標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取經(jīng)105℃干燥1h并置干燥器中冷卻至室溫的三氧化二砷(As2O3)0.1320g于100mL燒杯中，加入10mL氫氧化鈉溶液(2.5mol/L)，待溶解后加入5mL高氯酸、5mL硫酸，置電熱板上加熱至冒白煙，冷卻后，轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，并用水稀釋定容至刻度。此溶液每毫升含砷(五價)0.100mg。

　　17.9 砷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：吸取1.00mL砷標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。此溶液每毫升含砷(五價)1.00?g。

　　17.10 甲基紅指示劑(2g/L)：稱取0.1g甲基紅溶解于50mL乙醇(95%)中。

　　18 儀器

　　18.1 可見分光光度計。

　　18.2 砷化氫發(fā)生裝置(見圖1)。

　　19 分析步驟

　　19.1 樣品處理

　　19.1.1 糧食類食品：稱取5.00g樣品于250mL三角燒瓶中，加入5.0mL高氯酸、20mL硝酸、2.5mL硫酸(1+1)，放置數(shù)小時后(或過夜)，置電熱板上加熱，若溶液變?yōu)樽厣�，�?yīng)補(bǔ)加硝酸使有機(jī)物分解完全，取下放冷，加15mL水，再加熱至冒白煙，取下，以20mL水分?jǐn)?shù)次將消化液定量轉(zhuǎn)入100mL砷化氫發(fā)生瓶中。同時作空白消化。

　　19.1.2 蔬菜、水果類：稱取10.00～20.00g樣品于250mL三角燒瓶中，加入3mL高氯酸、20mL硝酸、2.5mL硫酸(1+1)。以下按19.1.1操作。

　　19.1.3 動物性食品(海產(chǎn)品除外)：稱取5.00～10.00g樣品于250mL三角燒瓶中，以下按19.1.1操作。

　　19.1.4 海產(chǎn)品：稱取0.100～1.00g樣品于250mL三角燒瓶中，加入2mL高氯酸、10mL硝酸、2.5mL硫酸(1+1)，以下按19.1.1操作。

　　19.1.5 含乙醇或二氧化碳的飲料：吸取10.0mL樣品于250mL三角燒瓶中，低溫加熱除去乙醇或二氧化碳后加入2mL高氯酸、10mL硝酸、2.5mL硫酸(1+1)，以下按19.1.1操作。

　　19.1.6 醬油類食品：吸取5.0～10.0mL代表性樣品于250mL三角燒瓶中，加入5mL高氯酸、20mL硝酸、2.5mL硫酸(1+1)，以下按19.1.1操作。

　　19.2 標(biāo)準(zhǔn)系列的制備

　　于6只100mL砷化氫發(fā)生瓶中，依次加入砷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0，0.25，0.5，1.0，2.0，3.0mL(相當(dāng)于砷0，0.25，0.5，1.0，2.0，3.0?g)，分別加水至3mL，再加2.0mL硫酸(1+1)。

　　19.3 樣品及標(biāo)準(zhǔn)的測定

　　于樣品及標(biāo)準(zhǔn)砷化氫發(fā)生瓶中，分別加入0.1g抗壞血酸，2.0mL碘化鉀(500g/L)—硫脲溶液(50g/L)，置沸水浴中加熱5min(此時瓶內(nèi)溫度不得超過80℃)，取出放冷，加入甲基紅指示劑(2g/L)1滴，加入約3.5mL氫氧化鈉溶液(400g/L)，以氫氧化鈉溶液(100g/L)調(diào)至溶液剛呈黃色，加入1.5mL檸檬酸(1.0mol/L)—檸檬酸銨溶液(1.0mol/L)，加水至40mL，加入一粒硼氫化鉀片劑，立即通過塞有乙酸鉛棉花的導(dǎo)管與盛有4.0mL吸收液的吸收管相連接，不時搖動砷化氫發(fā)生瓶，反應(yīng)5min后再加入一粒硼氫化鉀片劑，繼續(xù)反應(yīng)5min。取下吸收管，用1cm比色杯，在400nm波長，以標(biāo)準(zhǔn)管零管調(diào)吸光度為零，測定各管吸光度。將標(biāo)準(zhǔn)系列各管砷含量對吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計算回歸方程。

　　20 計算

　　式中：X——樣品中砷的含量，mg/kg或mg/L;

　　m1——測定用消化液從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的質(zhì)量，?g;

　　m——樣品質(zhì)量或體積，g或mL。

　　結(jié)果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。

　　21 允許差

　　相對相差≤15%。

　　附加說明：

　　本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。

　　本標(biāo)準(zhǔn)第一法由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所、青海省衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草;第二法由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)起草;第三法由華西醫(yī)科大學(xué)負(fù)責(zé)起草。

　　本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)解釋。